网上竞价编号

FJTH-J1420120425

网上竞价名称

畜禽主要动物疫病病原学检测盒等采购项目

竞价截止时间

2012-04-28 12:00:00

竞价开始时间

2012-04-28 10:00:00

合同包数量

2

具体说明

包号

中标供应商

中标金额

序号

基本需求
(品牌、技术指标等)

最高限价(元)

数量

供货及售后服
务要求

联系方式

采购单位

1

北京信达永汇科技有限公司

10500

1

其他货物,一、 禽流感病毒通用型荧光定量RT-PCR
*禽流感病毒通用型荧光定量RT-PCR检测试剂盒可用于检测所有15个亚型的A型流感病毒。
*操作过程符合GB/T 19438.1-2004《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》。
(一)试剂构成
试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照，具体成分参见表一。
*核酸扩增采用了一步法RT-PCR。
阳性对照采用体外反转录RNA。
表一：试剂盒组成(48头份/盒)
组成成份 体积
核酸扩增试剂
DEPC水 1ml×1管
RT-PCR反应液 750ul×1管
*RT-PCR酶(带盖PCR反应管装)(Promega固体酶) 1颗/管×12管
Taq酶(5U/ul) 12ul×1管
对照品
阴性对照 1ml×1管
阳性对照(非感染性体外转录RNA) 1ml×1管
试剂盒可用于几乎所有禽类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清或血浆等。
(二)体系扩增
1 扩增试剂准备(PCR前准备区)
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n(n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试 剂 RT-PCR反应液 Taq酶
用 量 15 ul 0.25 ul
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15ul，转移至样本处理区。
2 加样(样本处理区)
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10ul，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应(检测区)
3.1 循环条件设置
Program cycles Temperature (℃) Incubation
Time(min:sec) Acquisiton
Mode
1 1 42 30:00 None
2 1 92 3:00 None
3 5 92 10 None
45 30 None
72 1:00 None
4 40 92 10 None
60 30 收集荧光
5 1 40 0 None
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。
*【规格、贮藏及有效期】
48份/盒。试剂盒应 -20 ℃ 保存，到用户手上有效期应≥9个月。

10500

5

按用户需求

天海招标/0591-87878462

福建省动物疫病预防控制中心

北京信达永汇科技有限公司

10500

2

其他货物,二、禽流感病毒H5亚型荧光定量RT-PCR
*禽流感病毒H5亚型荧光定量RT-PCR检测试剂盒可用于检测H5亚型的禽流感病毒。
*操作过程符合GB/T 19438.2-2004《H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》。
(一)试剂构成
试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照。
*核酸扩增采用了一步法RT-PCR。
阳性对照采用体外反转录RNA。
试剂盒可用于几乎所有禽类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清或血浆等。
(二)体系扩增
1 扩增试剂准备(PCR前准备区)
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n(n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试 剂 RT-PCR反应液 Taq酶
用 量 15 ul 0.25 ul
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15ul，转移至样本处理区。
2 加样(样本处理区)
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10ul，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应(检测区)
3.1 循环条件设置
Program cycles Temperature (℃) Incubation
Time(min:sec) Acquisiton
Mode
1 1 42 30:00 None
2 1 92 3:00 None
3 5 92 10 None
45 30 None
72 1:00 None
4 40 92 10 None
60 30 收集荧光
5 1 40 0 None
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。

10500

5

按用户需求

天海招标/0591-87878462

福建省动物疫病预防控制中心

北京信达永汇科技有限公司

10500

3

其他货物,三、禽流感病毒H9亚型荧光定量RT-PCR
*禽流感病毒H9亚型荧光定量RT-PCR检测试剂盒可用于检测H9亚型的禽流感病毒。
*操作过程符合GB/T 19438.4-2004《H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》。
(一)试剂构成
试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照。
*核酸扩增采用了一步法RT-PCR。
阳性对照采用体外反转录RNA。试剂盒可用于几乎所有禽类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清或血浆等。
(二)体系扩增
1 扩增试剂准备(PCR前准备区)
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n(n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试 剂 RT-PCR反应液 Taq酶
用 量 15 ul 0.25 ul
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15ul，转移至样本处理区。
2 加样(样本处理区)
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10ul，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应(检测区)
3.1 循环条件设置
Program cycles Temperature (℃) Incubation
Time(min:sec) Acquisiton
Mode
1 1 42 30:00 None
2 1 92 3:00 None
3 5 92 10 None
45 30 None
72 1:00 None
4 40 92 10 None
60 30 收集荧光
5 1 40 0 None
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。

10500

5

按用户需求

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北京信达永汇科技有限公司

10500

4

其他货物,四、新城疫病毒荧光定量RT-PCR
*新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒可用于检测新城疫病毒。
(一)试剂构成
试剂盒组成包括应核酸扩增试剂及阴性对照和阳性对照。
*核酸扩增采用了一步法RT-PCR。
阳性对照采用体外反转录RNA。
试剂盒可用于几乎所有禽类相关样品的检测：包括肌肉组织、脏器、咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清或血浆等。
(二)体系扩增
1 扩增试剂准备(PCR前准备区)
从试剂盒中取出相应的RT-PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2,000rpm离心5sec。设所需PCR数为n(n = 样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试 剂 RT-PCR反应液 Taq酶
用 量 15 ul 0.25 ul
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，向其中加入n/4颗RT-PCR酶颗粒，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装15ul，转移至样本处理区。
2 加样(样本处理区)
在各设定的PCR管中分别加入上述样本处理步骤6.8.中制备的RNA溶液各10ul，盖紧管盖，放入荧光 PCR荧光检测仪内，记录样本摆放顺序。
3 RT-PCR反应(检测区)
3.1 循环条件设置
Program cycles Temperature (℃) Incubation
Time(min:sec) Acquisiton
Mode
1 1 42 30:00 None
2 1 92 3:00 None
3 5 92 10 None
45 30 None
72 1:00 None
4 40 92 10 None
60 30 收集荧光
5 1 40 0 None
3.2 仪器检测通道选择FAM通道。
4 结果分析条件设定
读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准。或可根据仪器噪音情况进行调整。
5 质控标准
5.1 阴性对照的检测结果为阴性。
5.2 阳性对照的Ct值应小于等于28.0。否则，此次实验视为无效。
6 结果判断
6.1 Ct值无数值的样本为阴性样本。
6.2 Ct值≤30.0的样本为阳性。
6.3 Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。

10500

5

按用户需求

天海招标/0591-87878462

福建省动物疫病预防控制中心

2

福州默克动物保健技术服务有限公司

2400

1

其他货物,五、口蹄疫A型抗体ELISA试剂盒
*(一)检测目的：
检测口蹄疫A型抗体
*(二)检测方法：
液相阻断ELISA
*(三)操作步骤：
1. ELISA板包被
用包被缓冲液稀释口蹄疫病毒兔抗血清(保存于 -20 ℃ )至工作浓度(1:1000)，在ELISA板(试剂盒内的塑料平底板)上每孔加入50 uL，振荡，封板或置湿盒内，室温过夜。
2. 待检血清包被
根据下图的布局，在U型反应板上(试剂盒内的塑料Ｕ型板)进行如下操作。
(1)待检血清加样
①A1-A10(第一行)和E1-E10(第五行)，每孔加入94.75 uL PBST溶液；1-10列的其他孔加入50 uL/孔 PBST溶液；
②A1-A10(第一行)和E1-E10(第五行)，每孔加入6.25 uL待检血清，并以50 uL的量往本列的下方做倍比稀释；A1稀释至D1，A2稀释至D2，E1稀释至H1，以此类推；
(2)阳性对照血清加样
①Ａ11加入75 uL PBST，B11-H11加入50 uL PBST；
②A11加入25 uL阳性对照血清(试剂盒配有，出厂浓度为1:23)，以50 uL倍比稀释至H11；
(3)阴性对照血清加样
①A12、B12孔加入50 uL/孔 PBST；
②A12加入50 uL阴性对照血清，50 uL倍比稀释至B12；(4)加病毒抗原
①从 -20 ℃ 取出口蹄疫病毒抗原；
②确认口蹄疫病毒抗原(5 mL/瓶)、试剂盒外包装和试剂盒内说明书，三者的生产批号必须一致；
③口蹄疫病毒抗原融化摇匀，按试剂盒说明书的比例，用PBST进行稀释，摇匀后倒入V型槽；
④U型板中加入稀释后的病毒抗原50 uL/孔；
⑤E12-H12每孔继续补加稀释后的病毒抗原50 uL/孔；
(5)振荡摇匀，标记板号，封板， 4 ℃ 过夜。
3. U型板液体转移到ELISA板
(1)用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
(2)从U型板中按顺序依次转移到ELISA板中，每孔50 uL；
(3)在ELISA板上誊抄U型板板号，封板， 37 ℃ 孵育1小时；
4. 加口蹄疫病毒豚鼠抗血清
(1)用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
(2)用豚鼠抗血清稀释液，稀释口蹄疫病毒豚鼠抗血清，至工作浓度(见口蹄疫病毒豚鼠抗血清管壁)；
(3)ELISA板中加入稀释后的口蹄疫病毒豚鼠抗血清，50 uL/孔；
(4)封板， 37 ℃ 孵育1小时；
5. 加兔抗豚鼠酶结合物
(1)用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
(2)用PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物，至工作浓度(1:500)，50 uL/孔；
(3)封板， 37 ℃ 孵育1小时；
6. 显色反应
(1)用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
(2)每孔加入50 uL底物溶液(务必加双氧水！)，
(3) 37 ℃ 孵育15分钟；
7. 终止反应，读数
每孔加入50 uL终止液，立即在492 nm波长下读取OD值。
8. 计算临界值
　　抗原对照孔为E12-H12，共4孔。弃去OD值最高和最低的2孔，计算剩余2孔德平均OD值，再除以2，即50%对照值。
　　该值即为临界值，表示阻断50%反应的对照OD值。
9. 效价的计算方法
　　以临界值为尺度，度量每份样品OD值的变化。每份样品，孔OD值=临界值时，所在孔的稀释度，即为样品的抗体滴度。
　　若临界值处于两个稀释孔的OD值之间，则取这两孔滴度的中间值。如位于孔1:25和孔1:26之间，则滴度为1:25.5。
　　10. 试验有效性验证
4孔抗原对照孔，OD值必须在1.0-2.0之间；
阳性对照血清抗体效价应在1:29-1:210；
阴性对照血清抗体效价应小于1:23；
11. 结果判定
具体动物、具体口蹄疫血清型抗体的阳性判定标准，根据国家当年相关标准执行。
*(四)规格、贮藏及有效期
10板/盒。试剂盒应 4 ℃ 保存，病毒成分－ 20 ℃ 保存，到用户手上有效期应≥5个月。

2500

1

按用户需求

天海招标/0591-87878462

福建省动物疫病预防控制中心

福州默克动物保健技术服务有限公司

7200

2

其他货物,四、口蹄疫亚1型抗体ELISA试剂盒
*(一)检测目的：
检测口蹄疫亚1型抗体
*(二)检测方法：
液相阻断ELISA
*(三)操作步骤：
1. ELISA板包被
用包被缓冲液稀释口蹄疫病毒兔抗血清(保存于 -20 ℃ )至工作浓度(1:1000)，在ELISA板(试剂盒内的塑料平底板)上每孔加入50 uL，振荡，封板或置湿盒内，室温过夜。
2. 待检血清包被
根据下图的布局，在U型反应板上(试剂盒内的塑料Ｕ型板)进行如下操作。
(1)待检血清加样
①A1-A10(第一行)和E1-E10(第五行)，每孔加入94.75 uL PBST溶液；1-10列的其他孔加入50 uL/孔 PBST溶液；
②A1-A10(第一行)和E1-E10(第五行)，每孔加入6.25 uL待检血清，并以50 uL的量往本列的下方做倍比稀释；A1稀释至D1，A2稀释至D2，E1稀释至H1，以此类推；
(2)阳性对照血清加样
①Ａ11加入75 uL PBST，B11-H11加入50 uL PBST；
②A11加入25 uL阳性对照血清(试剂盒配有，出厂浓度为1:23)，以50 uL倍比稀释至H11；
(3)阴性对照血清加样
①A12、B12孔加入50 uL/孔 PBST；
②A12加入50 uL阴性对照血清，50 uL倍比稀释至B12；(4)加病毒抗原
①从 -20 ℃ 取出口蹄疫病毒抗原；
②确认口蹄疫病毒抗原(5 mL/瓶)、试剂盒外包装和试剂盒内说明书，三者的生产批号必须一致；
③口蹄疫病毒抗原融化摇匀，按试剂盒说明书的比例，用PBST进行稀释，摇匀后倒入V型槽；
④U型板中加入稀释后的病毒抗原50 uL/孔；
⑤E12-H12每孔继续补加稀释后的病毒抗原50 uL/孔；
(5)振荡摇匀，标记板号，封板， 4 ℃ 过夜。
3. U型板液体转移到ELISA板
(1)用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
(2)从U型板中按顺序依次转移到ELISA板中，每孔50 uL；
(3)在ELISA板上誊抄U型板板号，封板， 37 ℃ 孵育1小时；
4. 加口蹄疫病毒豚鼠抗血清
(1)用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
(2)用豚鼠抗血清稀释液，稀释口蹄疫病毒豚鼠抗血清，至工作浓度(见口蹄疫病毒豚鼠抗血清管壁)；
(3)ELISA板中加入稀释后的口蹄疫病毒豚鼠抗血清，50 uL/孔；
(4)封板， 37 ℃ 孵育1小时；
5. 加兔抗豚鼠酶结合物
(1)用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
(2)用PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物，至工作浓度(1:500)，50 uL/孔；
(3)封板， 37 ℃ 孵育1小时；
6. 显色反应
(1)用PBST洗ELISA板5次，在吸水纸上拍干；
(2)每孔加入50 uL底物溶液(务必加双氧水！)，
(3) 37 ℃ 孵育15分钟；
7. 终止反应，读数
每孔加入50 uL终止液，立即在492 nm波长下读取OD值。
8. 计算临界值
　　抗原对照孔为E12-H12，共4孔。弃去OD值最高和最低的2孔，计算剩余2孔德平均OD值，再除以2，即50%对照值。
　　该值即为临界值，表示阻断50%反应的对照OD值。
9. 效价的计算方法
　　以临界值为尺度，度量每份样品OD值的变化。每份样品，孔OD值=临界值时，所在孔的稀释度，即为样品的抗体滴度。
　　若临界值处于两个稀释孔的OD值之间，则取这两孔滴度的中间值。如位于孔1:25和孔1:26之间，则滴度为1:25.5。
　　10. 试验有效性验证
4孔抗原对照孔，OD值必须在1.0-2.0之间；
阳性对照血清抗体效价应在1:29-1:210；
阴性对照血清抗体效价应小于1:23；
11. 结果判定
具体动物、具体口蹄疫血清型抗体的阳性判定标准，根据国家当年相关标准执行。
*(四)规格、贮藏及有效期
10板/盒。试剂盒应 4 ℃ 保存，病毒成分－ 20 ℃ 保存，到用户手上有效期应≥5个月。

7500

3

按用户需求

天海招标/0591-87878462

福建省动物疫病预防控制中心

福州默克动物保健技术服务有限公司

2300

3

其他货物,同上

2400

1

按用户需求

天海招标/0591-87878462

福建省动物疫病预防控制中心

福州默克动物保健技术服务有限公司

2300

4

其他货物,H9 HI、H5 HI阳性血清，H 9 HA /HI、H 5 HA /HI标准抗原
*【主要成分】
抗原为哈尔滨灭活的禽流感病毒，血凝效价≥7log2。阳性血清为SPF鸡感染禽流感病毒制备的高免血清，HI效价≥7log2。阴性血清为SPF鸡血清。
*【作用与用途】
用于HI试验检测禽流感抗体。
【操作过程】
1 材料
1.1 96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器(配有吸头)、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.2 0.01mol/L PBS
1.2.1 配制25倍PB 称量 2.74g Na2HPO4 和 0.79g NaH2PO。H2O，加蒸馏水至100mL；
1.2.2 配制1倍PBS 量取40ml 25倍PB，加入 8.5g NaCl，加蒸馏水至1000mL；
1.2.3 用NaOH或HCl调pH值至7.2；
1.2.4 69Kpa 15min高压灭菌或用微孔滤膜过滤除菌。
1.2.5 PBS一经使用，于2～8℃保存不超过3周。
1.3 阿氏(Alsevers)液 称葡萄糖 2.05g 、柠檬酸钠 0.8g 、柠檬酸 0.055g 、氯化钠 0.42g ，加蒸馏水至100mL，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa 15min高压灭菌，2～8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液　　采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用pH值7.2 0.01mol/L PBS液洗涤3次，每次均以3000rpm/min离心5min，洗涤后用PBS配成1%(V/V)红细胞悬液，2～8℃保存备用。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签上规格标注的量，用PBS溶解。
2　操作术式
2.1 血凝(HA)试验
2.1.1 在V型微量反应板中，每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原，反复抽打3～5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025ml加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃去。
2.1.4 每孔加0.025mL PBS。
2.1.5 每孔加入0.025mL 1%(V/V)鸡红细胞悬液。
2.1.6 将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温(20～25℃)下静置20～30分钟或2～8℃ 45～60分钟。在对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。
2.1.7 结果判定 将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数为血凝效价。
2.2 血凝抑制(HI)试验
2.2.1 根据HA试验测定的效价，计算配制4个血凝单位(4HAU)抗原。HA效价除以4即为含4HAU抗原的稀释倍数。例如，HA效价为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64(256除以4)。
2.2.2 第1～11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。
2.2.3 第1孔加入0.025mL血清，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。
2.2.4 第1～11孔均加入0.025mL的4HAU抗原，在室温(20～25℃)下静置30分钟或2～8℃ 50分钟。
2.2.5 每孔加入0.025mL 1%(V/V)的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温(20～25℃)下静置20～30分钟或2～8℃ 45～60分钟，对照红细胞将呈明显钮扣状沉于孔底。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。当阳性对照血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性对照血清效价不高于21og2时，试验方可成立。被检血清HI效价≤31og2判为阴性；＝41og2判为可疑(可疑样品应重检，重检效价≥41og2判为阳性，≤31og2判为阴性)；≥51og2判为阳性。
【规格与包装】
抗原为2ml/瓶，10瓶/盒；阳性血清为1ml/瓶，10瓶/盒。
【贮藏与有效期】
-20 ℃ 以下保存，到用户手上有效期≥12个月。

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5

其他货物,三、口蹄疫病毒O型(FMDV-O)抗体检测试剂盒
*(一)检测目的：检测抗口蹄疫病毒O型抗体
*(二)检测方法：阻断ELISA，检测O型中和抗体，用重组FMDV rP 13C 蛋白粒子包被，抗VP1蛋白A位点单抗为酶标抗体。在免疫地区能够用来做抗体监测和免疫效果评估。适用对象包括猪、牛、山羊以及绵羊等。
(三)试剂盒组成：
1、FMDV O型rP 13C 蛋白包被板 5块
2、10倍洗液 200毫升
3、样品稀释液 50毫升
4、HRPO酶标抗体 50毫升
5、阳性血清对照 0.5毫升
6、阴性血清对照 0.5毫升
7、TMB底物液 60毫升
8、终止液 30毫升
(四)注意事项：
1、使用之前请仔细阅读使用说和操作明；
2、试剂盒储存条件：2 -8 ℃ ；
(五)实验前准备：
1、 洗液10倍稀释：如20ml洗液，加入180ml去离子水混匀，备用。
2、 TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。
(六)操作步骤：
1、 使用前将试剂盒所有组件恢复到室温，取出抗原包被板；
2、 标记好样品、阳性对照和阴性对照，每孔加入样品稀释液80ul，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20ul；
3、 室温孵育60分钟；
4、 洗板：每孔加入洗涤液300ul ，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；
5、 每孔加入100ul酶标抗体，室温孵育60分钟；
6、 重复步骤4，洗涤3次；
7、 每孔加入TMB底物反应液100ul，室温暗处放置15分钟；
(七)读数：
每孔加入50ul终止液，在酶标仪450nm波长处读数。
(八)结果判定：
1、实验有效性判定
阴性对照OD值≥0.6
阳性对照OD值≤0.3
2、判定标准：
① SN值的计算方程式：
SN=【样品值/阴性值】
SN值≤0.60 判为阳性；
SN值＞0.60 判为阴性；
注：如果检测结果可疑，对样品进行再次检测；
【贮藏与有效期】2 -8 ℃ 保存，到用户手上保质期≥6个月。

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其他货物,同上

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7

其他货物,ND 标准抗原、阳性血清
*【主要成分】
抗原为青岛灭活的新城疫病毒，血凝效价≥7log2。阳性血清为SPF鸡感染新城疫病毒制备的高免血清，HI效价≥7log2。阴性血清为SPF鸡血清。
*【作用与用途】
用于HI试验检测新城疫抗体。
【操作过程】
1 材料
1.1 96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器(配有吸头)、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.2 0.01mol/L PBS
1.2.1 配制25倍PB 称量 2.74g Na2HPO4 和 0.79g NaH2PO。H2O，加蒸馏水至100mL；
1.2.2 配制1倍PBS 量取40ml 25倍PB，加入 8.5g NaCl，加蒸馏水至1000mL；
1.2.3 用NaOH或HCl调pH值至7.2；
1.2.4 69Kpa 15min高压灭菌或用微孔滤膜过滤除菌。
1.2.5 PBS一经使用，于2～8℃保存不超过3周。
1.3 阿氏(Alsevers)液 称葡萄糖 2.05g 、柠檬酸钠 0.8g 、柠檬酸 0.055g 、氯化钠 0.42g ，加蒸馏水至100mL，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa 15min高压灭菌，2～8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液　　采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用pH值7.2 0.01mol/L PBS液洗涤3次，每次均以3000rpm/min离心5min，洗涤后用PBS配成1%(V/V)红细胞悬液，2～8℃保存备用。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签上规格标注的量，用PBS溶解。
2　操作术式
2.1 血凝(HA)试验
2.1.1 在V型微量反应板中，每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原，反复抽打3～5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025ml加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃去。
2.1.4 每孔加0.025mL PBS。
2.1.5 每孔加入0.025mL 1%(V/V)鸡红细胞悬液。
2.1.6 将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温(20～25℃)下静置20～30分钟或2～8℃ 45～60分钟。在对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。
2.1.7 结果判定 将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数为血凝效价。
2.2 血凝抑制(HI)试验
2.2.1 根据HA试验测定的效价，计算配制4个血凝单位(4HAU)抗原。HA效价除以4即为含4HAU抗原的稀释倍数。例如，HA效价为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64(256除以4)。
2.2.2 第1～11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。
2.2.3 第1孔加入0.025mL血清，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。
2.2.4 第1～11孔均加入0.025mL的4HAU抗原，在室温(20～25℃)下静置30分钟或2～8℃ 50分钟。
2.2.5 每孔加入0.025mL 1%(V/V)的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温(20～25℃)下静置20～30分钟或2～8℃ 45～60分钟，对照红细胞将呈明显钮扣状沉于孔底。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。当阳性对照血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性对照血清效价不高于21og2时，试验方可成立。被检血清HI效价≤31og2判为阴性；＝41og2判为可疑(可疑样品应重检，重检效价≥41og2判为阳性，≤31og2判为阴性)；≥51og2判为阳性。
【规格与包装】
抗原为2ml/瓶，10瓶/盒；阳性血清为1ml/瓶，10瓶/盒。
【贮藏与有效期】
-20 ℃ 以下保存，到用户手上有效期≥12个月。

2400

1

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2300

8

其他货物,同上

2400

1

按用户需求

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2300

9

其他货物,同上

2400

1

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48000

10

其他货物,二、高致病性猪蓝耳病抗体检测试剂盒
*(一)检测目的：
检测高致病性猪蓝耳病抗体
*(二)检测方法：
间接ELISA
*(三)、试剂盒内容：
酶标板5块
洗液*10：250mL
样本稀释液*3：100mL
酶标复合物：30mL
底物：30mL
终止液：30mL
阳性对照：2.2ml
阴性对照：2.2ml
盖膜：10块
(四)、操作步骤：
所有试剂回到室温
阴阳性对照不要稀释，样品要进行200倍稀释。、
阴阳性对照必须是双孔。
加50ul阳性对照、阴性对照、及稀释的样品到反应板中。
盖膜， 37 ℃ 作用60分钟
去膜，用300ul洗液洗涤3遍，拍干
在每个孔中加入50ul酶标抗体。
盖膜， 37 ℃ 作用60分钟。
去掉膜，用洗液(300ul)洗3次，拍干。
加入50ul底物，20 -25 ℃ 作用10分钟。
加入50ul终止液，混匀。
10-15分钟之内在450nm下读数并记录结果。
(五)、结果判定
阳性对照平均值OD应大于0.6，且阳性对照/阴性对照平均值大于4.0
结果用IRCP表示，
【贮藏与有效期】2 -8 ℃ 保存，到用户手上保质期≥6个月。

52000

4

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23000

11

其他货物,一、猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒
*【试剂盒的组成】
ELISA板：抗原包被的96孔ELISA板2块，孔底无色透明，无杂质。
血清/二抗稀释液1瓶:30mL，淡黄色透明澄清液体。
标准阳性血清1支：20μL，澄清，浅黄色液体。
标准阴性血清1支：20μL，澄清，浅黄色液体。
10×浓缩洗液1瓶：50mL，澄清透明，可能出现白色结晶，加热溶化即可。
浓缩酶标二抗1支：150μL，无色透明液体
底物溶液A一瓶：7mL，棕色瓶装，内装溶液为无色、透明。
底物溶液B一瓶：7mL，棕色瓶装，内装溶液为无色、透明。
终止液1瓶：15mL，无色透明液体，有酸性刺激性气味。
血清稀释板1块：孔底无色透明，无杂质。
说明书一份
*【试剂准备】
洗液：将10×浓缩洗液用蒸馏水或去离子水按1:9的比例混合即可。
*【操作步骤】
在ELISA反应板中加入血清/二抗稀释液，50μL/孔。
待检血清的稀释：在血清稀释板中加入血清稀释液，98μL/孔。将待检血清按顺序加入到血清稀释板中，2μL/孔。标准阳性对照血清和标准阴性对照血清加入到血清稀释板的相应位置，4μL/孔。加入血清后充分混匀。
将稀释好的血清按顺序加入到ELISA板中，50μL/孔。每个样本换一个吸头。加样时应尽量避免起泡及液体溅出，避免样本间相互污染。加样结束后，将ELISA反应板放到 37 ℃ 温箱中，反应1h。
取出反应板，弃去反应液，每孔加入300μL洗涤液，室温放置3min，弃去洗液，重复3次；或者用自动洗板机洗板3次。
用血清/酶标二抗稀释液按1:100比例稀释浓缩酶标二抗，100μL/孔。加样结束后，将ELISA反应板放到 37 ℃ 温箱中，反应1h。
取出反应板，弃去反应液，每孔加入300μL洗涤液，室温放置3min，弃去洗液，重复3次；或者用自动洗板机洗板3次。
将底物A和B按等体积进行混合，混合后立即加入到ELISA反应板中，100μL/孔，室温避光显色10min。计时从加第一孔开始。
加入终止液：100μL/孔。避免出现气泡。
读数：酶标仪上读取450nm吸光值，620nm作为背景参考波长。
结果计算及实验成立条件：计算样本的IE值。IE=样本OD450nm/标准阳性对照血清OD450nm×100% 。当标准阳性对照血清OD值应≥1.0，标准阴性对照血清IE值应≤8%时，实验成立。
结果判定
当血清样本的IE值≥10%时，为猪瘟抗体阳性；
当血清样本的IE值≤8%时，为猪瘟抗体阴性；
当血清样本的IE值在8%-10%之间时，为可疑。可重复检测。如仍在此范围，判为阴性。
*【包装规格】2块ELISA板/盒，最多可检测192个血清样本。
【贮藏与有效期】2 -8 ℃ 保存，到用户手上保质期≥6个月。

24000

10

按用户需求

天海招标/0591-87878462

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